柱花草炭疽菌致病力喪失突變菌株1869的T-DNA插入位點側(cè)翼序列的克隆

摘要： 通過對實驗室已構(gòu)建的柱花草炭疽菌T-DNA突變體庫中各轉(zhuǎn)化子致病力的測定,獲得致病力喪失突變菌株1869。對其進(jìn)行PCR檢測以驗證T-DNA在1869基因組中插入情況,并測定觀察其菌落直徑、菌落形態(tài)及產(chǎn)孢量等生物學(xué)特性,利用TAIL-PCR克隆標(biāo)記基因側(cè)翼序列,采用生物信息學(xué)方法比對基因信息。結(jié)果表明,與柱花草炭疽菌野生型菌株CH008相比,突變菌株1869表現(xiàn)致病力喪失,菌落生長速率也顯著低于野生型;然而,在分生孢子形態(tài)、產(chǎn)孢能力、孢子萌發(fā)率等方面與野生型并無明顯差異。TAIL-PCR擴增得到T-DNA插入位點RB端序列467bp,LB端側(cè)翼序列388bp,經(jīng)兩側(cè)序列拼接比對,所得序列與Pac1同源性達(dá)到92%~96%,推測可能由于基因表達(dá)產(chǎn)物調(diào)節(jié)菌株對pH值的敏感性,從而影響了其致病過程。 （共8頁）