忍冬原生質(zhì)體分離條件研究

摘要： 目的:探討忍冬原生質(zhì)體分離的最佳條件,為忍冬原生質(zhì)體培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及遺傳轉(zhuǎn)化提供大量?jī)?yōu)質(zhì)的原生質(zhì)體。方法:分別對(duì)忍冬原生質(zhì)體分離過程中的若干影響因子如:酶液組成、酶解方式、酶解時(shí)間、酶解溫度、滲透壓進(jìn)行比較分析,以確定最佳的分離條件。結(jié)果:確定了最優(yōu)化的忍冬原生質(zhì)體分離條件,即以生長(zhǎng)旺盛的疏松的忍冬愈傷組織作為分離原生質(zhì)體所需材料,以1.5%纖維素酶+0.25%果膠酶作為分離原生質(zhì)體所用酶液,以含有0.7 mol.L-1甘露醇作為滲透保護(hù)劑的細(xì)胞-原生質(zhì)體清洗液(CPW)溶液進(jìn)行酶液的配制,于25℃靜置條件下酶解12 h。結(jié)論:利用該實(shí)驗(yàn)所確定的忍冬原生質(zhì)體最佳分離條件可獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)的原生質(zhì)體,為后續(xù)忍冬細(xì)胞融合以及遺傳轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)奠定良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 （共5頁）