植物表達(dá)載體在三分三發(fā)根中的高效表達(dá)

摘要： 目的建立基于發(fā)根培養(yǎng)的三分三Anisodus acutangulus遺傳轉(zhuǎn)化體系及在三分三發(fā)根中表達(dá)外源基因的方法。方法由種子直接萌發(fā)得到無菌苗,建立了三分三的無菌苗培養(yǎng)系統(tǒng)。將植物高效表達(dá)載體pCAMBI-A1304+導(dǎo)入經(jīng)過“disarmed”改造的根癌農(nóng)桿菌C58C1(攜帶pRiA4質(zhì)粒),獲得了攜帶外源基因表達(dá)載體的重組C58C1工程菌。取生長良好的幼嫩真葉作為外植體,在乙酰丁香酮的誘導(dǎo)下用重組C58C1進(jìn)行感染,誘導(dǎo)發(fā)根。選取在無激素培養(yǎng)基上生長迅速,分支多的發(fā)根單克隆進(jìn)行繼代培養(yǎng)。經(jīng)過3次繼代培養(yǎng),PCR(polymerase chain reaction,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))檢測用于驗證發(fā)根型質(zhì)粒pRiA4和表達(dá)型質(zhì)粒pCAMBIA1304+是否整合到三分三發(fā)根基因組內(nèi)。結(jié)果建立了基于發(fā)根培養(yǎng)的三分三遺傳轉(zhuǎn)化體系,發(fā)根誘導(dǎo)頻率達(dá)到100%,PCR檢測表明pRiA4和pCAMBIA1304+質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化率達(dá)到32%。結(jié)論該方法可以用于在三分三發(fā)根中高效表達(dá)外源基因,為實現(xiàn)基于發(fā)根的三分三產(chǎn)托品烷類生物堿的代謝工程奠定了基礎(chǔ)。 （共4頁）