葎草花粉變應(yīng)原的純化及免疫特性分析

摘要： 目的純化葎草花粉變應(yīng)原并分析其免疫學(xué)活性。方法粗制葎草花粉提取液經(jīng)Sephadex G-75 Sephacryl S-200HR層析柱純化,分段收集各組份。SDS-PAGE檢測(cè)各組分蛋白相對(duì)分子質(zhì)量,ELISA抑制實(shí)驗(yàn)及免疫印跡實(shí)驗(yàn)分析各組分蛋白質(zhì)對(duì)特異性IgG和IgE的抑制率及與患者血清的反應(yīng)率。結(jié)果濃縮粗制葎草花粉提取液經(jīng)Sephadex G-75層析柱純化,得到兩個(gè)峰,第一峰富含蛋白質(zhì),第二峰含有大量色素,蛋白含量甚微,棄之;收集第一峰及其谷段洗脫液(P液),經(jīng)Sephacryl S-200HR層析柱純化,分離出4個(gè)組份,即第一峰(P1)、谷段(V)、第二峰(P2)和末段(E)。電泳結(jié)果顯示純化后的葎草花粉含20多種蛋白質(zhì)條帶,相對(duì)分子質(zhì)量區(qū)帶為5.0×103～97.4×103,P1段主要是相對(duì)分子質(zhì)量為43×103～97.4×103的蛋白質(zhì),P2段和V段主要是相對(duì)分子質(zhì)量為5.0×103～43×103的蛋白質(zhì),E段主要是相對(duì)分子質(zhì)量為5.0×103以下的蛋白質(zhì);ELISA抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示P1、V、P2、E對(duì)sIgG抑制率分別為68%、70%、95%、5%,對(duì)sIgE抑制率分別為25%、64%、71%、11%;免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示P1、V、P2、E與患者血清sIgG的反應(yīng)率分別為65.63%、78.13%、87.50%、6.25%,與患者血清sIgE的反應(yīng)率分別為25.00%、71.88%、84.38%、15.63%。結(jié)論草花粉含20多種蛋白質(zhì)成分,相對(duì)分子質(zhì)量在5×103～43×103之間的蛋白質(zhì)變應(yīng)原性和免疫原性均較強(qiáng),為主要變應(yīng)原;相對(duì)分子質(zhì)量在43×103～94.7×103的蛋白質(zhì)免疫原性強(qiáng)而變應(yīng)原性弱,為次要變應(yīng)原。 （共5頁(yè)）