尿液分析儀

　　應(yīng)用

　　50年代即有人采用單一干化學(xué)試帶法測(cè)定尿中蛋白質(zhì)和葡萄糖，利用肉眼觀察試帶顏色的變化與標(biāo)準(zhǔn)板時(shí)行比較，得出相應(yīng)的數(shù)值。80年代，由于計(jì)算機(jī)技術(shù)的高度發(fā)展和廣泛使用，尿液自動(dòng)化分析儀也得到迅速發(fā)展，逐步由原來(lái)的半自動(dòng)化發(fā)展到全自動(dòng)化。尿液分析儀常依測(cè)試項(xiàng)目將其分為二類：①主要用于初診病人及健康檢查使用的8-11項(xiàng)篩選組合尿試帶。8項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目包括蛋白、葡萄糖、PH、酮體、膽紅素、尿膽原、紅細(xì)胞(潛血)和亞硝鹽；9項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目除上述8項(xiàng)檢查外增加了尿白細(xì)胞檢查。10項(xiàng)尿液分析儀檢測(cè)項(xiàng)目9項(xiàng)基礎(chǔ)上增加了尿比密檢查。11項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目則又增加了維生素C檢查。②主要用于已確診疾病的療效觀察，如腎疾患可用PH、蛋白、隱血（紅細(xì)胞）組合試帶；糖尿病用PH、糖、酮體組合試帶；肝病患者用膽紅素、尿膽原組合試帶。

　　原理

　　此類儀器一般用微電腦了控制，采用球面積分儀接受雙波長(zhǎng)反射光的方式測(cè)定試帶上的顏色變化進(jìn)行半定量測(cè)定。試劑帶上有數(shù)個(gè)含各種試劑的試劑墊，各自與尿中相應(yīng)成分進(jìn)行獨(dú)立反應(yīng)，而顯示不同顏色，顏色的深淺與尿液中某種成分成比例關(guān)系，試劑帶中還有另一個(gè)“補(bǔ)償墊”，作為尿液本底顏色，了對(duì)有色尿及儀器變化待所主生的誤差進(jìn)行補(bǔ)償。

　　將吸附有尿液的試劑帶放在儀器比色槽內(nèi)，試劑帶上已產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)的各種試劑墊被光源照射，其反射光被球面積分儀接收，球面積分儀的光電管被反射的雙波長(zhǎng)光（通過(guò)濾片的測(cè)定光和一束參考光）照射，各波長(zhǎng)的選擇由檢測(cè)項(xiàng)目決定。

　　儀器按下列公式自動(dòng)化計(jì)算出反射率，然后與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，自動(dòng)找印也各種成分的相應(yīng)結(jié)果，尿液中某種成分含量高，其相應(yīng)試劑墊的反射光較暗，否則較強(qiáng)。

　　反射率分式：R（%）=Tm.Cs/TsCm×100%

　　式中的R（%）為反射率；Tm為試劑墊對(duì)測(cè)定波長(zhǎng)的反射強(qiáng)度；Ts為試劑墊對(duì)參考波長(zhǎng)的反射強(qiáng)度；Cm為較準(zhǔn)墊對(duì)測(cè)定疵長(zhǎng)的反射強(qiáng)度；Cs為校準(zhǔn)對(duì)參考波長(zhǎng)的反射強(qiáng)度。

　　檢測(cè)方法

　　1、尿PH檢查

　　結(jié)果有二重含義：①反映體內(nèi)酸堿代謝狀態(tài)；②由于尿蛋白、尿比密的測(cè)定原理是基于膜尬上最后PH試劑的顏色變化，因此分析PH變化還有監(jiān)控尿PH變化對(duì)其它膜尬區(qū)反應(yīng)的干擾作用。

　　2、尿比密檢查

　　尿比密測(cè)定曾采用懸浮法和折射儀法，主要測(cè)定尿內(nèi)固體物濃度隨著10項(xiàng)尿液分析儀的問(wèn)世，試帶法測(cè)定尿比密得到廣泛使用，其膜塊中主要含有多聚電解質(zhì)（甲乙烯酸酰馬不酐）、酸堿指示劑及緩沖物，這是采用酸磚瓦指示劑法，其原時(shí)是根據(jù)經(jīng)過(guò)多聚電解質(zhì)的Pka改變與尿液離子濃度相關(guān)原理。麻劑條中的多聚電解質(zhì)含有隨尿標(biāo)本中離大濃度則解離的酸性基團(tuán)，離子越多，酸性基團(tuán)解離子越多，而使膜尬中的PH改變，這種改變可由膜塊中的酸堿性指示劑的顏色變化顯示出來(lái)，進(jìn)而換算成尿液的比密值。

　　3、尿蛋白檢查

　　尿液分析儀尿蛋白測(cè)定是根據(jù)指示劑蛋白誤差原理，膜塊中主要含有酸堿性指示劑棗溴酚蘭、枸櫞酸緩沖系統(tǒng)和表南的活性劑。在PH3.2時(shí)，溴酚產(chǎn)生的陰離子，與帶陽(yáng)離子的蛋白質(zhì)（白蛋白）結(jié)合后發(fā)生顏色變化。 　干化學(xué)法測(cè)定尿蛋白操作簡(jiǎn)單快速，但在使用應(yīng)注意：①病人服用奎寧和磺胺嘧啶等藥物引起的強(qiáng)堿性尿時(shí)''會(huì)使干化學(xué)法出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果而磺基水楊酸法出南假陰性結(jié)果.可用稀乙酸將尿液PH調(diào)5-7''再行實(shí)驗(yàn)''借以區(qū)別是否由于強(qiáng)堿性尿而導(dǎo)致假陽(yáng)性.②研究證明幾十種藥物可使尿蛋白檢查出現(xiàn)假陽(yáng)性''有學(xué)者對(duì)用大劑量青霉素患者給藥前后進(jìn)行了尿蛋白的檢測(cè)''結(jié)果表明:滴注250萬(wàn)單位組2小時(shí)\320萬(wàn)單位3組小時(shí)，480萬(wàn)單位組5小時(shí)可能對(duì)磺基水楊酸法產(chǎn)生假陽(yáng)性，對(duì)干化學(xué)法產(chǎn)生假陰性。③不同測(cè)定方法對(duì)病人尿液內(nèi)不同種類蛋白質(zhì)檢測(cè)的敏感不同，雙縮脲定量可以對(duì)白蛋白，球蛋白顯赤似的敏感性，而干化學(xué)測(cè)量球蛋白的敏感性僅是白蛋白的1/100-1/50。因此對(duì)于腎病患者特別是在疾病發(fā)展過(guò)種中需在系統(tǒng)觀察尿蛋白含量的病例應(yīng)使用磺基水楊酸法（或加熱乙酸法）定性和雙縮脲法進(jìn)行定量試驗(yàn)。④標(biāo)本內(nèi)含有其它分泌物（如生殖系統(tǒng)分泌物）或含有較多細(xì)胞成分時(shí)，可引起假陽(yáng)性。 建議以磺基水楊權(quán)法作為干化學(xué)檢測(cè)尿蛋白的參比方法。

　　4、尿葡萄糖測(cè)定

　　尿試帶法測(cè)定尿葡萄糖是采用酶法。其膜塊中含有葡萄糖氧化酶、過(guò)氧化物酶和色原。不同廠家采用的色源有異主要有二類：①采用碘化鉀做色原，陽(yáng)性反應(yīng)呈紅色；②采用鄰甲聯(lián)苯胺作色原，陽(yáng)性反應(yīng)呈藍(lán)色。其測(cè)定原量是葡萄糖氧化酶把葡萄糖氧化成葡萄糖醛酸和過(guò)氧化氫，后者再由過(guò)氧化物酶催化釋放出，而使色原呈顏色，以此類方法最常用。 　尿試帶法在使用中應(yīng)注意：①尿試帶法與班氏定性法的特異性不同前者的特異性強(qiáng)，吸與葡萄糖反應(yīng)；而后者與尿內(nèi)反有不原性糖和所有還原性物質(zhì)都反應(yīng)，故在尿試帶法呈陰性的標(biāo)本有可能在班氏法呈陽(yáng)性結(jié)果；②干化學(xué)法與班氏法的靈敏度不同，干化學(xué)法的靈敏度高，葡萄糖含量為1.67-2.78mmol/L時(shí)即可出現(xiàn)弱陽(yáng)性；而班氏法8.33mmol/L才呈弱陽(yáng)性表現(xiàn)；③干擾物質(zhì)對(duì)兩法的影響不同：尿液內(nèi)含有對(duì)氧親和力較強(qiáng)的還原物質(zhì)可與班氏法中的銅離子作用產(chǎn)生假陽(yáng)性，但卻可使干化學(xué)法試帶產(chǎn)生的H2O2還原顯色而使其成假陰性。排除的方法是先將尿液煮沸幾分鐘破壞維生素C再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)?，F(xiàn)已有含維生素C氧化酶的試帶的可以排除這一干擾。④干化學(xué)法測(cè)定尿葡萄糖只是一般的半定量試驗(yàn)，它所設(shè)計(jì)的濃度水平與傳統(tǒng)的班氏存在的著差異，二者有可相互比；因此對(duì)于糖尿病的動(dòng)態(tài)觀察，在干化學(xué)出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，最好用濕化學(xué)定量方法，以確立準(zhǔn)確的尿葡萄糖范圍或收集晝夜尿標(biāo)本作尿糖定量。

　　5、尿酮體檢查

　　檢測(cè)尿酮體的膜塊中主要含有亞硝基鐵氰化鈉，或與尿液中的乙酰乙酸、丙酮主生紫色反應(yīng)。其對(duì)乙酰乙酸的敏感性為50-100mg/L對(duì)丙酮?jiǎng)t為400-700mg/L，不與β-羥丁酸起反應(yīng)。 　在使用中就注意：①由于尿酮體中的丙酮和乙酰乙酸都具有揮發(fā)性，酰乙酸更易受熱妥解成丙酮；尿液被細(xì)菌污染后，酮體消失，因此尿液必須新鮮，及時(shí)送檢，以免因酮體的揮發(fā)或分解出現(xiàn)假陰性結(jié)果或結(jié)果偏低；②干學(xué)法與酮體粉法靈敏度存在差異：酮體粉法對(duì)乙酰乙酸與丙酮的敏感性分別為80mg/L和100mg/L。不如試帶法敏感，故同一病理標(biāo)本兩面種方法可能出現(xiàn)結(jié)果的差異，分析結(jié)果時(shí)應(yīng)特別注意；③不同病因引起的酮癥，酮體的成分不同，即使一病人不同病程也可有差異，例如在糖尿病酮癥酸中毒早期病命名中，主要酮體成分β羥丁酸，很少或缺乏乙酰乙酸，此時(shí)測(cè)得結(jié)果可導(dǎo)致對(duì)總酮體量估計(jì)不足。在糖尿病酮癥酸中毒癥狀緩解之后，β-羥丁酸轉(zhuǎn)變?yōu)橐阴Ｒ宜幔炊挂阴Ｒ宜岷勘瘸跏技毙云谠龈?，易?duì)病情估計(jì)過(guò)重。因此檢驗(yàn)人員必須注意病程發(fā)展，與臨床醫(yī)生共同分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

　　6、尿膽紅素、尿膽原檢查

　　尿膽紅素測(cè)定原理是結(jié)合膽紅質(zhì)在強(qiáng)酸性介質(zhì)中，與2，4-二氯苯胺重氮鹽起偶聯(lián)反應(yīng)呈紫紅色；測(cè)定尿膽原的原理與改良Ehrlich法相同。 　兩個(gè)方法主要注意點(diǎn)為：①標(biāo)本必須新鮮，以免膽紅素在陽(yáng)光照射下成為膽綠素；尿膽原在氧化成尿膽素。②尿液中含高濃度維生素C和亞硝酸鹽時(shí)，抑制偶氮反應(yīng)使尿膽紅素呈假陰性。當(dāng)患者接受大量的氯丙嗪治療或尿中含有鹽酸苯偶氮吡啶的代謝產(chǎn)生時(shí)，可呈假陽(yáng)性。③尿液中一些內(nèi)源物質(zhì)如膽色素原、吲哚、膽紅素等可使尿膽原檢查結(jié)果出現(xiàn)陽(yáng)性，一些藥物也可產(chǎn)色干擾實(shí)驗(yàn)。④正常人尿膽原排出理每天波動(dòng)很大，夜間和上午量少，午后則迅速增加，在午后2-4時(shí)達(dá)最高峰；同時(shí)尿膽原的清除率與尿PH相關(guān)，PH5.0時(shí)，清除率為2ml/min;Ph8.0時(shí)增加至25ml/min，因此有學(xué)者倡用預(yù)先給予患者服用碳酸氨鈉，以堿化尿液慢集午后2-4時(shí)尿（2小時(shí)排出量）進(jìn)行測(cè)定，以提高檢出率。

　　7、尿亞硝酸鹽檢查

　　膜塊中主要含有對(duì)氨基苯砷酸和1，2，3，4-四羥基對(duì)苯喹啉-3酚。大多當(dāng)數(shù)尿路感染由大腸埃希菌引起的，正常人尿液中含有來(lái)自食物或蛋白質(zhì)代謝產(chǎn)生的硝酸鹽，池尿液中有大腸埃希菌感染增殖時(shí)，將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，可將膜塊中對(duì)氨基礎(chǔ)苯砷酸重氮化而成重氮鹽，后者與1，2，3，4-四羥基對(duì)苯喹啉-3鞭偶聯(lián)使膜塊產(chǎn)生紅色，借以診斷患者是否被大腸埃希菌感染，其檢出敏感度為0.03-0.06g/l 。尿液中亞硝酸鹽檢出率受感染細(xì)菌是否含有硝酸鹽還原酶，食物中是否含有選題的硝酸鹽、尿液標(biāo)本是否在膀胱停留4小時(shí)以上三者影響，符合上述三個(gè)條件，此試驗(yàn)的檢出率為80%，反之可呈現(xiàn)陰性結(jié)果。因此本試驗(yàn)陰性關(guān)不能排除細(xì)菌尿的可能，以樣亞硝酸鹽試驗(yàn)陽(yáng)性也不能完全肯定泌尿系統(tǒng)感染，標(biāo)本放置過(guò)久或污染可呈假陽(yáng)性，應(yīng)結(jié)合其它尿液分析結(jié)果，綜合分析得出正確的判斷。

　　8、尿白細(xì)胞檢查

　　尿試帶法檢查尿內(nèi)白細(xì)胞的原理基于中性粒細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)含有特異性酯酶，可或作用于膜塊中的吲哚酚酯，關(guān)與重氮鹽反應(yīng)形成紫色縮合物，其顏色深淺與中性粒細(xì)胞的多少呈正比例關(guān)系。操作時(shí)應(yīng)注意：①尿液標(biāo)本必須新鮮，留尿后應(yīng)立即測(cè)定，以免白細(xì)胞契壞，導(dǎo)致干化學(xué)法與鏡檢法人為的實(shí)驗(yàn)誤差；②此法只能測(cè)中性粒細(xì)胞，不與單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞反應(yīng)，在腎移植病人發(fā)生排異反應(yīng)時(shí)，尿中的以淋巴細(xì)胞為主的或其它病因引起的單核細(xì)胞尿時(shí)會(huì)產(chǎn)生陰性結(jié)果；③尿液中污染甲醛或含有高濃度膽紅素或使用某些藥物時(shí)，吉產(chǎn)生假陽(yáng)性；尿蛋白>5g/L或尿液中含有大劑量先鋒霉素等紅物時(shí)，可便結(jié)果偏低或出現(xiàn)假性結(jié)果。 　由于尿液分析儀白細(xì)胞檢測(cè)與顯微鏡下計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)原理截然不同，其報(bào)告方式也是兩種不同的概念，很難找出兩者的對(duì)應(yīng)關(guān)系，迄今還沒(méi)有一種直接的換算方式，因此儀器法白細(xì)胞檢查只是一個(gè)篩選試驗(yàn)，絕不可代替顯微鏡檢查。

　　9、尿血紅蛋白、尿紅細(xì)胞檢查

　　膜塊中主要含有過(guò)氧化氫茄香素或過(guò)氧化氫烯鈷和色原（如鄰甲聯(lián)苯胺）兩種物質(zhì)。其原理為尿液中紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白或其破壞釋放出的血紅蛋白均具有過(guò)氧化氫酶樣活性，可使過(guò)氧化氫茄香素或過(guò)氧化氫烯鈷分解出，后者能氧化有關(guān)色原（如鄰甲聯(lián)苯胺）使之呈色。 　尿試帶法檢查尿內(nèi)紅操作時(shí)應(yīng)注意：①因?yàn)椴煌瑥S家或不同型號(hào)的試劑帶敏感度不同，使用時(shí)必須注意批間差；②干化學(xué)法既可與完整的紅細(xì)胞應(yīng)應(yīng)又能與游離的血紅蛋白反應(yīng)，因此報(bào)告時(shí)要了解臨床診斷，綜合分析。由于腎病患者終尿中的紅細(xì)胞可因各種因素變形裂解使血紅蛋白逸出，可導(dǎo)致儀器法與水測(cè)法的差異；③尿中含有的易熱酶、肌紅蛋白或菌尿可引起假陽(yáng)性；④大量維生素C可干擾試驗(yàn)結(jié)果，使某些試帶產(chǎn)生假陰性，應(yīng)予以警惕

　　結(jié)果分析

　　不同的干擾因素對(duì)上述三種方法的測(cè)量的比密結(jié)果影響也不同：第一是尿液中的非離子化合物增多時(shí)，可使懸浮法和折射儀法測(cè)得的比密結(jié)果偏高，而試帶法只與離子濃度有關(guān)，不受其影響；第二是尿液中蛋白增多時(shí)，三種方法都具有不同程度的增高，以試帶法最為明顯，折射儀法次之；第三是試帶法易受PH的影響，當(dāng)尿液的PH>7時(shí)應(yīng)在測(cè)定結(jié)果的基礎(chǔ)是增加0.005作為由于尿液PH損失的補(bǔ)償。

　　分類

　?。?）按工作方式分類 可分為濕式尿液分析儀和干式尿液分析儀。其中干式尿液分析儀主要用于自動(dòng)評(píng)定干試紙法的測(cè)定結(jié)果，因其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、使用方便，臨床普遍應(yīng)用。

　　（2）按測(cè)試項(xiàng)目分類，可分為8項(xiàng)尿液分析儀、9項(xiàng)尿液分析儀、10項(xiàng)尿液分析儀、11項(xiàng)尿液分析儀、12項(xiàng)尿液分析儀、13項(xiàng)尿液分析儀和14項(xiàng)尿液分析儀。檢測(cè)項(xiàng)目包括尿蛋白、尿葡萄糖、尿pH、尿酮體、尿膽紅質(zhì)、尿膽原、尿潛血、亞硝酸鹽、尿白細(xì)胞、尿比重、維生素C和濁度。

　?。?）按自動(dòng)化程度分類 可分為半自動(dòng)尿液分析儀和全自動(dòng)尿液分析儀。