原理
abi prism 310型基因分析儀(即dna測序儀),采用毛細管電泳技術取代傳統(tǒng)的聚丙烯酰胺平板電泳,應用該公司專利的四色熒光染料標記的ddntp(標記終止物法),因此通過單引物pcr測序反應,DNA測序儀生成的pcr產物則是相差1個堿基的3‘’‘’末端為4種不同熒光染料的單鏈dna混合物,使得四種熒光染料的測序 pcr產物可在一根毛細管內電泳,從而避免了泳道間遷移率差異的影響,大大提高了測序的精確度。由于分子大小不同,在毛細管電泳中的遷移率也不同,當其通過毛細管讀數(shù)窗口段時,激光檢測器窗口中的ccd(charge-coupled device)攝影機檢測器就可對熒光分子逐個進行檢測,激發(fā)的熒光經光柵分光,以區(qū)分代表不同堿基信息的不同顏色的熒光,并在ccd攝影機上同步成像,分析軟件可自動將不同熒光轉變?yōu)閐na序列,從而達到dna測序的目的。分析結果能以凝膠電泳圖譜、熒光吸收峰圖或堿基排列順序等多種形式輸出。
它是一臺能自動灌膠、自動進樣、自動數(shù)據(jù)收集分析等全自動電腦控制的測定dna片段的堿基順序或大小和定量的高檔精密儀器。pe公司還提供凝膠高分子聚合物,包括dna測序膠(pop 6)和genescan膠(pop 4)。這些凝膠顆??讖骄?,避免了配膠條件不一致對測序精度的影響。它主要由毛細管電泳裝置、macintosh電腦、彩色打印機和電泳等附件組成。電腦中則包括資料收集,分析和儀器運行等軟件。它使用最新的ccd攝影機檢測器,使dna測序縮短至2.5h,pcr片段大小分析和定量分析為 10~40min。
由于該儀器具有dna測序,pcr片段大小分析和定量分析等功能,因此可進行dna測序、雜合子分析、單鏈構象多態(tài)性分析(sscp)、微衛(wèi)星序列分析、長片段pcr、rt-pcr(定量pcr)等分析,臨床上可除進行常規(guī)dna測序外,還可進行單核苷酸多態(tài)性(snp)分析、基因突變檢測、hla配型、法醫(yī)學上的親子和個體鑒定、微生物與病毒的分型與鑒定等
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