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HPLC

高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)。

  高效液相色譜是色譜法的一個重要分支,以液體為流動相,采用高壓輸液系統(tǒng),將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相色譜柱,在柱內各成分被分離后,進入檢測器進行檢測,從而實現(xiàn)對試樣的分析。該方法已成為化學、醫(yī)學、工業(yè)、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術。

  高效液相色譜法有“三高一廣一快”的特點:

 ?、俑邏海毫鲃酉酁橐后w,流經色譜柱時,受到的阻力較大,為了能迅速通過色譜柱,必須對載液加高壓。

 ?、诟咝В悍蛛x效能高??蛇x擇固定相和流動相以達到最佳分離效果,比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

 ?、鄹哽`敏度:紫外檢測器可達0.01ng,進樣量在uL數(shù)量級。

  ④應用范圍廣:百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析,特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析,顯示出優(yōu)勢。

 ?、莘治鏊俣瓤?、載液流速快:較經典液體色譜法速度快得多,通常分析一個樣品在15~30分鐘,有些樣品甚至在5分鐘內即可完成,一般小于1小時。

  此外高效液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點,但也有缺點,與氣相色譜相比各有所長,相互補充。高效液相色譜的缺點是有“柱外效應”。在從進樣到檢測器之間,除了柱子以外的任何死空間(進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等)中,如果流動相的流型有變化,被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬,柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。


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